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绝对回收率、相对回收率、提取回收率、方法回收率的异同  

2013-09-17 16:56:56|  分类: 默认分类 |  标签: |举报 |字号 订阅

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绝对回收率、相对回收率、提取回收率、方法回收率的异同

  
 在药动学实验的方法学研究中经常看到这些概念 
 没有查阅具体的相关标准和要求,仅根据自己的理解和工作经验,我认为:

1.绝对回收率=提取回收率=萃取回收率,是用药品加血浆经萃取处理后的进样峰面积除以该药品溶液直接进样峰面积的比值,一般来说,该比值不可能超过100%,能做到80%就不错了。以前国家对绝对提取率还有些要求,现在随着lc-ms的应用,最低定量限已经能做到很低,也就不需要再对绝对回收率提具体要求,只要相对回收率满意就可以。

2.相对回收率=方法学回收率,是血浆处理后的进样峰面积代入血浆标准曲线,计算所得浓度除以真实血样浓度.该比值在100%左右.一般要求高、中浓度点在15%以内,低浓度点可适当放宽。

(1)举例:10ng A药加入1ml空白血浆(10ng/ml),经萃取处理后用0.5ml流动相复溶,进样所得峰面积8000;配制对照溶液(浓度10ng/0.5ml=20ng/ml),进样所得峰面积假设为10000.那么萃取回收率为8000/10000=80%.

(2)举例:上述经萃取处理的血浆溶液(10ng/ml)峰面积8000,代入标准曲线计算,假如计算所得浓度为8.5ng/ml,相对回收率则为8.5/10=85%.

提取回收率的计算方法不对,请不要误导大家。本人认为正确的计算方法如下:
1. 外标法中:是用含药血浆经萃取处理后的进样峰面积除以血浆经萃取处理后加药物溶液的进样峰面积的比值,即前者药物经过了提取,后者仅血浆经过了提取而药物没有,这才是真正意义上的提取回收率。
二楼讲到的“用药品加血浆经萃取处理后的进样峰面积除以该药品溶液直接进样峰面积的比值”,实际上计算所得的结果是所谓的方法回收率,在
LC-MS中是“基质效应”ד提取回收率”的结果,而非单纯的提取回收率。
2. 内标法中:测定提取回收率的操作方法同外标法,即概念是相同的,但在计算时需要用内标的峰面积对样品的峰面积进行校正,更加准确一些。
 

谢谢,解释的非常清楚了。
另外问一下,如果用到内标,绝对回收率计算时,应该是测得的样品峰面积与内标的峰面积比值用来计算回收率吧?为什么在相对回收率计算时要代入标准曲线计算浓度,而不用内标法计算。
相对回收率一般要求高、中浓度点在15%以内,对这高、中、低浓度又有何要求呢,一般是标准曲线的最低、最高、中浓度点吧? 
 1. 我2楼的帖子说的是在不用内标情况下,如果有内标,我觉得样品和内标的绝对回收率应该分别计算,样品绝对回收率同前,内标绝对回收率计算方式与样品一样(由样品换为内标即可)。
2.在有内标情况下计算方法学回收率,方法和2楼相似,只不过血浆标准曲线x轴为样品与内标峰面积比ratio,然后将测得的峰面积比代入标准曲线计算。
3.方法学回收率的高中浓度点选择,高、中点可以分别选择最高、中间浓度,低浓度点一般不会选择最低浓度(LOQ),而是选择次低浓度点(法规要求中有具体要求,我一时记不清楚了)。举例:1、2、5、10、20、50、100ng/ml为标准曲线点,一般来说,低浓度点会选择2ng/ml,中浓度点50ng/ml,高浓度点100ng/ml. 

提取回收率的计算方法不对,请不要误导大家。本人认为正确的计算方法如下:
1. 外标法中:是用含药血浆经萃取处理后的进样峰面积除以血浆经萃取处理后加药物溶液的进样峰面积的比值,即前者药物经过了提取,后者仅血浆经过了提取而药物没有,这才是真正意义上的提取回收率。
二楼讲到的“用药品加血浆经萃取处理后的进样峰面积除以该药品溶液直接进样峰面积的比值”,实际上计算所得的结果是所谓的方法回收率,在
LC-MS中是“基质效应”ד提取回收率”的结果,而非单纯的提取回收率。
2. 内标法中:测定提取回收率的操作方法同外标法,即概念是相同的,但在计算时需要用内标的峰面积对样品的峰面积进行校正,更加准确一些。
 说实话,据我所知,很多学校之间出版的书对绝对回收率和相对回收率都搞不清楚。特别是在有内标的情况下,到底算绝对的还是相对的,大家意见很不一致。 
 
是啊,还有个问题我也迷糊:一般要求方法回收率控制在100%附近,这就要求内标与药物的绝对回收率相近;但又有人说二者的绝对回收率相差很大也没关系,只要相对稳定就行。这么一来,怎么报道方法回收率啊?偏离100%很远也没关系吗? 
 
源  绝对回收率、相对回收率、提取回收率、方法回收率的异同

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